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第五章胚胎移植技术 胚胎移植的概念 胚胎移植（ , ET），又称受精卵移植，是借助一定的器械，通过手术或手术，从优良雌性动物的输卵管或子宫中取出早期胚胎。非手术方法。 胚胎经质量检验后，移植到另一只处于同一生理阶段的雌性动物的相应部位，使其产生后代，从而达到产生优良供体后代的目的，又称借孕。 提供胚胎的个体称为捐赠者（donor）； 接受胚胎的个体称为受体 () 超排卵 超排卵（简称“超排卵”）是指应用外源性刺激物，经性腺激素处理，诱发发情，释放比正常情况下更多的卵子。 通过与超排卵的母鼠交配，可以获得多于正常数量的胚胎，然后通过适当的方法将这些胚胎取出，用于胚胎移植或作为相关科学研究的材料。 发情周期 在生理或非妊娠状态下三代试管，雌性动物每隔一定时间就会发情一次。 通常，将本次发情开始至下一次发情开始，或本次发情结束至下一次发情结束的这段时间称为发情周期。 : of 胚胎移植原理 胚胎移植技术程序 1. 胚胎移植概述 胚胎移植历史 胚胎移植技术应用 胚胎移植成本 胚胎移植经济效益 27日，W. Heape of the英国剑桥大学首次将安哥拉兔的受精卵移植到比利时兔的输卵管中，获得了2只安哥拉兔。

这是首次证实受精卵（早期胚胎）在宿主母体内发育的可能性。 此后，在兔、大鼠和小鼠身上进行了更多的实验，成为实验生物学研究受精和胚胎发育的重要方法。 家畜实验阶段的家畜胚胎移植最早于1930年代在绵羊身上进行。 20武汉三代试管50年代，羊和猪的胚胎移植实验经常被报道。 20武汉三代试管60年代，由于超数排卵、同步发情、胚胎采集和移植等方法的改进，特别是Sugie成功设计出带有气囊装置的非手术式采卵装置，这项技术被应用到畜牧业生产中。 畜牧业生产应用阶段 20武汉三代试管70年代中期以来，胚胎移植技术已经发展到实际应用阶段。 1975年1月，国际胚胎移植学会第一次成立大会在美国科罗拉多州丹佛市召开。 胚胎工程研发阶段 20武汉三代试管80年代以来，随着胚胎移植研究的不断拓展和深入，胚胎经过加工改造，出现胚胎冷冻、胚胎分割、胚胎嵌合等胚胎工程研发。 、胚胎性别鉴定、体外受精、核移植、基因移植、胚胎干细胞等 二、胚胎移植的应用范围 应用于家畜改良 应用于特定品种的育种 应用于动物生物多样性 其他应用：转基因动物、性别控制、体外受精在家畜改良中的应用人工授精技术可使优良雄性的繁殖性能提高数十至数百倍。

但是，对于优良的雌性动物，受产仔数和世代间隔的限制，尤其是牛、羊等繁殖力低的家畜品种。 通过超数排卵和胚胎移植技术（和：MOET），牛羊生长性状的年遗传进度较正常繁殖可提高80%和70%； 产奶性状可提高33%。 从引进到形成纯种群需要7-8代，15-20年，用于牛羊等低生育力家畜在特定品种繁育中的应用。 然而助孕供卵男宝宝，使用 MEOT 方法，一次可以获得一个纯种种群。 20武汉三代试管80年代初胚胎移植，美国、澳大利亚、新西兰从欧洲引进的大型肉牛品种均采用胚胎移植技术进行繁殖。 2000年前后，我国的波尔山羊也进行了胚胎移植繁殖。 在动物生物多样性方面的应用在保护动物遗传资源、提高家畜生产性能、拯救濒危野生动物等方面试管包成功，胚胎移植技术发挥着重要作用。 冷冻可以很好地保存濒危动物的胚胎或生殖细胞，但动物雌性的减少也意味着这种动物的胚胎或生殖细胞无法移植。 科学家们已经开始对这种动物的亚种或近缘种进行实验研究，并取得了一些成功。 例如，斑马胚胎移植到马身上国内助孕供卵公司，蒙古马胚胎移植到驴身上，野牛移植到荷斯坦牛身上。 在其他方面，胚胎移植的应用是克隆技术的必要过程。 体外受精必须依靠胚胎移植来实现“试管婴儿”的持续发育。 转基因和动物生物反应器研究也必须依赖胚胎移植。 3、胚胎移植费用 购买或培育种畜成本及饲养费、胚胎费用分摊 繁育费 激素：FSH、LH、PG 手术费用：手术药品及耗材、手术助手报酬等 技术费用：约定报酬技术人员其他：实验室配置、差旅费、招待费 4、胚胎移植的经济效益 胚胎移植是一个复杂的技术过程，各个环节环环相扣，是一个不能出错的系统工程。

影响胚胎移植成功率的因素很多，同时其运营成本也比较高。 这使得它在应用中的经济利益方面具有很高的风险。 如果不是基于种群扩充的迫切需要、供体经济价值高、繁殖目的，一般尽量采用自然繁殖。 在特殊情况下，如育种初期，少数优秀个体的扩大，胚胎移植可以创造更好的经济效益。 二、胚胎移植的生理学基础和原理 胚胎移植的生理学基础 胚胎移植的基本原理 胚胎移植的生理学基础 成年雌性家畜的卵巢中有几千到几万个卵泡。 排卵次数和排卵次数可达十次以上，每个发情周期有一个生殖器官。 胚胎在妊娠发育早期处于游离状态。 胚胎发育不存在免疫问题。 胚胎的遗传性不受接受者的影响。 供体和受体具有相同分类学属性的环境的同一性动物的生理一致性：受体和供体在发情时间方面的同步性动物解剖学的一致性：空间环境的一致性胚胎的发育期：一定是在周期的黄体期。 胚胎质量：胚胎必须是正常的，在过程中不受不良因素影响。 施主的生产性能和经济价值均高于施主。 受体的经济价值大于受体； 全身及生殖器官的生理状态。 供受者身体健康，营养良好，身体健康，尤其是生殖器官生理功能正常，否则会影响胚胎移植的效果。

三、胚胎移植技术流程 供受体的选择 超排处理 从供体母体采集交配胚 胚胎检验 胚胎保存与培养 移植 供受体观察 1.供体 供体应具有较高的育种价值。 供体生殖功能应处于高状态：产后60天以上，无生殖系统疾病，体质强健。 受者应易于购买，繁殖性能好，适应地性强，体型中等偏上，非优良品种，受者身体健康，供者与受者发情时间相近到或符合发情季节。 促性腺激素导致卵巢中比正常情况下更多的卵泡发育和排卵，称为超数排卵。 原理：超数排卵的原理是通过外源性激素的作用，在某一阶段增加血液中促性腺激素的浓度，降低发育中卵泡的闭锁率，使卵泡从卵泡发育早期进入晚期（成熟）卵泡的数量增加动物发情周期。 用于超数排卵的激素 用于超数排卵的激素主要有促卵泡激素、促排卵激素和黄体生成素。 研究和生产中常用的促卵泡激素有促卵泡激素（FSH）和孕马血清促性腺激素（mare serum，PMSG）； 促排卵激素包括黄体生成素（LH）和人绒毛膜促性腺激素（human，hCG）和促性腺激素释放激素（GnRH）及其合成类似物； 促黄体激素主要是前列腺素（，PG）及其类似物。

超排FSH法促卵泡激素（FSH）减量注射法：供牛在发情后9-13天肌肉注射FSH，早晚各1次，间隔12小时，4天减量注射. 第3天同时宫腔注射PGF2α2.0-2.4mg或氯前列醇0.6mg。 若国产FSH总剂量为325单位，治疗方法见附图。 超排的用量根据不同厂家的激素而定。 国产激素320-360单位，进口激素28-36毫克。 同时发情超排程序PMSG法 孕马血清促性腺激素（PMSG）治疗方法：在发情第11～12天，肌注PMSG 2500～借卵生女儿，48h后宫注射PGF2α 2.4mg。 发情后约18小时，肌肉注射等量抗PMSG。 影响超数排卵效果的因素超数排卵是一个非常复杂的过程。 人们对超排方式的选择不是很确定，效果也不够稳定，尤其是个体之间。 影响超排效果的主要因素有牲畜个体情况、环境条件、超排处理方法等。 家畜个体条件对超数排卵效果的影响品种在 3 至 10 岁之间更有可能获得更多的胚胎； 影响季节和月份饮食营养水平 超排处理方式影响促性腺激素种类 促性腺激素生产厂家和批次 LH和GnRH的应用 纯化FSH（不含LH）的应用 抗PMSG的应用 关系性周期阶段与超排卵效应之间的受体同发情 在发情周期的不同阶段，生殖器官的内分泌环境、生化和组织学特征对不同发育阶段的胚胎有不同的影响。

无论何种动物的胚胎，只有移植到与其发育要求相适应的受体生殖道中，才能继续发育。 因此，在新鲜胚胎移植过程中，在供体超排卵的同时，需要对受体进行发情同步( )处理，使生殖状态与供体同步。 牛，受体的发情时间可略早于供体，但相差不超过±1天； 胚胎移植具有更高的受孕率。 同步发情的原理 同步发情是用外源性激素或药物治疗一组雌性动物，使其卵巢的生理功能处于同一阶段，发情集中在预定的时间内。 发情同步技术一般采用两种方法。 一种是同时给一群雌性动物服用黄体酮类药物，以抑制卵巢上卵泡的生长发育和发情表现。 周期性黄体发生退化，卵泡发育同时发生，引起母体发情（图6-9A）。 另一种方法是使用性质完全不同的PG胚胎移植知识.ppt 第65页，加速功能性黄体的退化，使卵巢提前摆脱高水平孕激素的控制，使群坝卵巢上的卵泡开始发育。同时发育，从而达到同步发情（图6-9B）。 3、供母的配种，必须选用优良种公进行多次配种，一般8-12小时一次，直至发情结束。

交配前应检查种公的精液质量。 但是当优秀的育种雄性不够时，可以考虑第一次用原杂交种，再用人工授精，也可以全部人工授精。 4. 胚胎采集胚胎冲洗液的配制：杜氏磷酸盐缓冲液PBS、布林斯特溶液SOF合成输卵管液胚胎手术采集输卵管冲洗：正向冲洗、反向胚胎子宫角冲洗非手术采集胚胎二通法三通法5、胚胎检查 收集的洗液静置，洗液分离。 胚胎分选：将胚胎转移到培养基或储存介质中。 胚胎鉴定：根据透明带、胚胎细胞、发育阶段和细胞在透明带中的比例，确定胚胎等级。 第6天采集的胚胎（未采摘） 2-4细胞胚胎 6.胚胎保存 胚胎降温：停止胚胎发育，延长胚胎体外存活时间 体外培养：将胚胎置于体温下，在培养中培养基，使其继续发育 胚胎冷冻：经过一定的处理程序，将胚胎冷却冷冻，保存在液氮中。 7、胚胎移植 胚胎移植是将胚胎移植到受体生殖道的适当部位，使其继续发育成胎儿。 移植的方法根据动物的不同分为手术移植和非手术移植。 外科移植 外科移植主要用于羊、猪等中小型动物和实验动物。 根据胚胎移植同一性原则，胚胎回收部位必须与移植部位一致，才能保证胚胎移植成功，即从输卵管回收的胚胎必须移植到输卵管内； 从子宫角回收的胚胎必须转移到子宫角的前部。 1/3 的地方。

因此，手术移植的方法根据移植部位的不同分为输卵管移植和子宫角移植。 非手术移植 八、供受体术后观察处理 供受体抗炎治疗 健康状况检查 复情状态检查 妊娠检查确认妊娠 一次移植三个胚胎，全部成活 受体母羊和所有受体生羊肉 （一）输卵管卵母细胞移植 先将黄体一侧的输卵管引出胚胎移植，找到喇叭口胚胎移植知识.ppt 第65页，将装有胚胎的移植器插入喇叭口2-3厘米，注入胚胎。 (2) 子宫角移植 将黄体侧子宫角拉出腹腔后，将胚胎移植针在前1/3处避开血管插入子宫角，摆动针头至确认针头在子宫腔内时注入胚胎。 无论是输卵管移植还是子宫角移植，都需要避免注入空气。 移植后将输卵管及子宫角送回腹腔，按恢复手术要求缝合腹壁伤口。 目前，非手术转移方法仅在牛等大型动物身上取得成功。 非手术移植胚胎的操作类似于人工授精。 操作者采用直肠抓取法，将胚胎经宫颈移植至黄体侧子宫角前1/3处，然后将胚胎缓慢注入子宫，取出移植枪。 对于幼龄母牛或宫颈较紧的母牛胚胎移植，移植枪插入困难时，可先用宫颈扩张器扩张宫颈后再插入。 不要强行插入，以免损伤宫颈。 19 检查黄体 18 17 打孔移植胚胎 20 16 配种 15 配种 14 发情鉴定 配种 7:00FSH 1.5ml 14:00 取栓 18:00 FSH 1.5ml 13 7:00FSH 2ml 14:00 PG6ml 18:00 FSH 2ml 7 : 00FSH 2.5ml 18:00 FSH 2.5ml 7:00FSH 4ml 18:00 FSH 4ml 12 11 10 放栓剂* * * * * * * * * * * * * * * * * , ET 女性生殖内分泌调节和雄性动物

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